Estudo de Monnina oblongifolia

O estudo teve como ponto de partida a ausência de informações na literatura científica sobre os aspectos fitoquímicos e biológicos de Monnina oblongifolia, um subarbusto da família Polygalaceae comumente encontrado em beira de estradas no sul do Brasil. Considerando a riqueza em biodiversidade do país e o potencial de descoberta de novos compostos bioativos em espécies vegetais, o objetivo principal foi realizar um estudo fitoquímico e biológico completo de M. oblongifolia, focando na avaliação da sua atividade antioxidante e da capacidade de inibição da enzima acetilcolinesterase (AChE). A escolha dessa enzima se justifica pela sua importância na hidrólise da acetilcolina, neurotransmissor crucial para a memória e aprendizagem, e sua relevância no contexto de doenças neurodegenerativas como a Doença de Alzheimer. O estudo visava identificar os compostos responsáveis por essas atividades, contribuindo para o conhecimento da composição química desta espécie e seu possível potencial terapêutico.

Para alcançar os objetivos, o estudo utilizou uma metodologia rigorosa de extração e fracionamento dos compostos presentes em M. oblongifolia. Inicialmente, foram coletadas folhas e raízes da planta, que foram secas, trituradas e maceradas em álcool para obter o extrato bruto. Esse extrato bruto foi submetido a dois métodos distintos de fracionamento: (i) filtração em coluna de sílica gel, utilizando hexano, acetato de etila e etanol como solventes para gerar frações com diferentes polaridades; e (ii) partição líquido-líquido, também utilizando diferentes solventes. A fração de acetato de etila, obtida em ambos os métodos, recebeu atenção especial devido à sua maior riqueza em compostos fenólicos e flavonoides. O fracionamento cromatográfico adicional das frações permitiu o isolamento e purificação de compostos para posterior análise espectroscópica (espectrometria de IV e RMN de 1H e 13C), permitindo sua identificação estrutural. A utilização dessas metodologias garantiu uma análise completa e abrangente da composição química da planta.

As análises espectroscópicas permitiram identificar alguns dos compostos presentes nas diferentes frações de M. oblongifolia. Na fração de acetato de etila, foram isolados e identificados quercetina glicosilada e ácido cumárico. Já na fração butanol, obtida por partição líquido-líquido, observou-se a formação de um precipitado que, após análise espectroscópica, foi identificado como um éster de glicose e um isopreno. A identificação desses compostos forneceu informações valiosas sobre a composição química da planta e serviu de base para a correlação com as atividades biológicas observadas. A caracterização estrutural detalhada dos compostos foi feita por meio de análise espectroscópica uni e bidimensional, possibilitando a determinação da estrutura molecular e elucidando a presença de diferentes classes de compostos, como flavonoides e outros metabólitos secundários.

Os resultados obtidos no estudo revelaram a presença de uma variedade de metabólitos secundários em Monnina oblongifolia, com destaque para a fração de acetato de etila, rica em compostos fenólicos e flavonoides. Esta fração apresentou a maior atividade antioxidante, confirmada pelos testes de poder redutor e captura de radicais livres (DPPH). A alta atividade antioxidante está diretamente relacionada à alta concentração de flavonoides e compostos fenólicos. Adicionalmente, o extrato bruto e a fração etanólica mostraram uma expressiva atividade inibidora da enzima acetilcolinesterase (AChE), superior a 50% de inibição em ambos os casos. Os valores de CE50 (concentração inibitória para 50% da atividade enzimática) foram baixos, sugerindo uma alta potência inibidora. Esses resultados comprovam o potencial de M. oblongifolia como fonte de compostos bioativos com atividades antioxidantes e inibidoras da AChE, com implicações potenciais no tratamento de doenças neurodegenerativas. A identificação dos compostos específicos, suas estruturas e quantificação são passos importantes para futuras investigações e potenciais aplicações farmacêuticas.

A atividade antioxidante do extrato bruto e das frações de Monnina oblongifolia foi determinada utilizando dois métodos distintos: o teste do poder redutor e o teste de captura de radicais livres pelo DPPH (1,1-difenil-2-picril-hidrazil). O teste do poder redutor avalia a capacidade da amostra de reduzir íons férricos (Fe3+) a íons ferrosos (Fe2+), enquanto o teste do DPPH mede a capacidade de sequestro de radicais livres através da redução do DPPH, um radical estável com coloração púrpura que se torna amarelo ao capturar um átomo de hidrogênio de compostos antioxidantes. A absorbância das soluções foi medida em espectrofotômetro UV-Vis, a 720 nm para o teste do poder redutor e a 517 nm para o teste do DPPH. Para ambos os testes, utilizou-se ácido ascórbico como padrão de comparação e a análise foi realizada em triplicata, seguindo metodologias adaptadas de Moresco et al. (2012). A determinação do conteúdo de fenólicos totais foi realizada de acordo com o método adaptado de Brighente et al. (2007), utilizando-se o reagente Folin-Ciocalteau e ácido gálico como padrão, medindo a absorbância a 720 nm. A quantificação de flavonoides foi feita pela complexação com cloreto de alumínio (AlCl3), gerando um deslocamento batocrômico na absorbância.

Os resultados demonstraram uma forte correlação entre o conteúdo de compostos fenólicos e flavonoides e a atividade antioxidante. A fração de acetato de etila, obtida por ambos os métodos de fracionamento (filtração em coluna de sílica gel e partição líquido-líquido), apresentou o maior teor de fenólicos e flavonoides, e consequentemente, a maior atividade antioxidante, tanto no teste do poder redutor quanto no teste do DPPH. O extrato bruto e as frações de acetato de etila e butanol apresentaram acentuada atividade antioxidante na captura de radicais livres, com a fração de acetato de etila apresentando um valor de CE50 (concentração efetiva para 50% de inibição) inferior a 10 ppm. As demais frações (insolúvel, emulsão 1, emulsão 2 e butanol) mostraram valores de CE50 mais elevados. No teste de captura de radicais livres pelo DPPH, o extrato bruto e as frações obtidas pela filtração em sílica gel apresentaram aproximadamente 90% de atividade antioxidante a 200 µg/mL. A presença de flavonoides, com destaque para a quercetina glicosilada identificada, contribui significativamente para a capacidade antioxidante.

A acetilcolinesterase (AChE) é uma enzima que hidrolisa a acetilcolina, um neurotransmissor essencial para a memória e aprendizagem. Na doença de Alzheimer, a concentração de acetilcolina é reduzida devido à diminuição da atividade da colina acetiltransferase, enzima responsável pela sua síntese. A inibição da AChE é, portanto, uma estratégia terapêutica importante para o tratamento sintomático da doença de Alzheimer leve a moderada, aumentando os níveis de acetilcolina na fenda sináptica. Atualmente, existem poucos fármacos aprovados para o tratamento desta doença, incluindo medicamentos sintéticos como tacrina, donepezila e rivastigmina, além de princípios ativos extraídos de plantas, como a galantamina, considerada a mais eficaz. Este estudo investigou o potencial inibidor da AChE presente em extratos e frações de Monnina oblongifolia, buscando alternativas terapêuticas naturais para o tratamento da doença.

A atividade inibidora da acetilcolinesterase (AChE) foi avaliada utilizando uma metodologia adaptada da literatura (Magina et al., 2012). As amostras (extrato bruto e frações) foram dissolvidas em etanol e testadas em microplacas de 96 poços. O ensaio baseou-se na reação entre a AChE, o substrato iodeto de acetiltiocolina e o reagente de Ellman (ácido 5,5'-ditio-bis-2-nitrobenzoico-DTNB), que gera um produto colorido medido em espectrofotômetro UV-Vis a 405 nm. A inibição enzimática foi calculada pela comparação da absorbância da amostra com a de um controle negativo (sem amostra, atividade enzimática 100%) e um controle positivo (Reminyl, contendo galantamina como padrão). O método permitiu a determinação da taxa de inibição da enzima pelas diferentes amostras, e a determinação da CE50, ou seja, a concentração de amostra necessária para obter 50% de inibição da atividade enzimática. O uso de tampões específicos (Tris-HCl) em diferentes pHs foi crucial para otimizar as condições da reação enzimática.

Os resultados do ensaio mostraram que o extrato bruto de M. oblongifolia e a sua fração etanólica inibiram a AChE em mais de 50%, com valores de CE50 de 10 µg/mL e 8 µg/mL, respectivamente. As frações de hexano e acetato de etila também apresentaram atividade inibidora, embora menor (44,2% e 38,0%, respectivamente). Esses resultados sugerem a presença de compostos com potencial inibidor da AChE em M. oblongifolia, especialmente no extrato bruto e fração etanólica, que podem ser promissores para o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento da doença de Alzheimer. A comparação com a galantamina, um inibidor de AChE conhecido, reforça a importância dos resultados obtidos, abrindo caminho para futuras pesquisas que busquem isolar e identificar os compostos responsáveis pela atividade inibidora observada. A alta taxa de inibição, em comparação com a atividade antioxidante, merece atenção em futuros estudos.

A análise do extrato bruto de Monnina oblongifolia por meio de diferentes técnicas de fracionamento, incluindo cromatografia em coluna de sílica gel e partição líquido-líquido, permitiu a identificação de diversos compostos. A fração de acetato de etila, obtida em ambos os procedimentos, se destacou pela riqueza em compostos fenólicos e flavonoides. Especificamente, o fracionamento cromatográfico desta fração permitiu o isolamento e a caracterização de dois compostos: a quercetina glicosilada e o ácido cumárico. A quercetina glicosilada é um flavonoide conhecido por suas propriedades antioxidantes, enquanto o ácido cumárico é um composto fenólico também associado a atividades biológicas relevantes. A identificação desses compostos foi realizada por meio de análise espectroscópica, utilizando técnicas como IV e RMN, que permitiram a elucidação de suas estruturas químicas e a confirmação de suas identidades.

Além dos compostos encontrados na fração de acetato de etila, a partição líquido-líquido do extrato bruto também gerou uma fração butanólica. Nesta fração, observou-se a formação de um precipitado que foi separado e analisado por métodos espectroscópicos. A análise revelou que o precipitado consiste em uma glicose ligada a um isopreno através de uma ligação éster. Este composto, com estrutura inédita descrita na literatura para M. oblongifolia, adiciona informações importantes sobre a complexa composição química da planta. A análise espectroscópica uni e bidimensional permitiu a elucidação completa de sua estrutura molecular. A presença deste composto contribui para a compreensão da diversidade de metabólitos secundários produzidos por M. oblongifolia.

A identificação dos compostos e sua quantificação nas diferentes frações permitiram estabelecer uma relação entre a composição química e as atividades biológicas observadas. A fração de acetato de etila, rica em compostos fenólicos e flavonoides, incluindo quercetina glicosilada, apresentou a maior atividade antioxidante, sugerindo uma contribuição significativa desses compostos para esta propriedade. Embora não haja uma correlação direta entre os compostos isolados e a inibição da AChE, a alta atividade inibitória observada no extrato bruto e na fração etanólica sugere que outros compostos ainda não identificados podem estar envolvidos nesta atividade. A identificação do éster de glicose e isopreno, uma estrutura nova, abre perspectivas para futuras investigações sobre seu possível papel nas atividades biológicas da planta. Estudos adicionais são necessários para elucidar completamente a relação entre a composição química e as atividades farmacológicas de M. oblongifolia.